Diagnóstico ELISA Kit For Chicken Pork Duck 96 Wells/Kit Sensitivity de MQCA 0,5 Ppb

Kit de teste MQCA ELISA para Frango Porco Pato 96 poços/sensibilidade do kit 0,5 ppb

 

1. Princípio

Este kit de teste é baseado no imunoensaio enzimático competitivo para a detecção de MQCA na amostra.Os antígenos de acoplamento são pré-revestidos nas tiras dos micropoços.O MQCA na amostra e os antígenos de acoplamento pré-revestidos nas tiras do micropoço competem pelo anticorpo anti-MQCA.Após a adição do conjugado enzimático, o substrato TMB é adicionado para coloração.O valor da densidade óptica (OD) da amostra tem uma correlação negativa com o MQCA nela.Este valor é comparado com a curva padrão e a concentração de MQCA é posteriormente obtida.

 

2. Especificações técnicas

Sensibilidade: 0,5 ppb
Temperatura da incubadora: 25 ℃
Tempo de incubação: 30min～15min

Limite de detecção:
Tecido 1 ppb

Taxa de reação cruzada:
MQCA 100%
Olaquindox <0,1%
Taxa de recuperação:
Tecido 85%±10%

 

3. Componentes

 

1	Tiras de micropoços	12 tiras com 8 poços removíveis cada
2	6 × solução padrão (1 mL cada)	0 ppb	0,5 ppb
		1,5 ppb	4,5 ppb
		13,5 ppb	40,5 ppb
3	Conjugado Enzimático Concentrado	1 ml	boné vermelho
4	Solução de trabalho de anticorpo	8 ml	boné azul
5	Substrato A	7ml	boné branco
6	Substrato B	7ml	boné preto
7	Solução de parada	7ml	boné amarelo
8	Solução de redissolução	50ml	tampa transparente
9	20× tampão de lavagem concentrado	40ml	boné branco

 

4. Materiais necessários, mas não fornecidos

1) Equipamentos: leitor de microplacas (450 nm / 630 nm), homogeneizador, oscilador, centrífuga, pipetas medidoras, secador de nitrogênio e balança (sensibilidade recíproca de 0,01 g), Incubadora.
2) Micropipetadores: monocanal 20 a 200 µL e 100 a 1000 µL e multicanal 30～300 µl;
3) Reagentes: Acetato de etila, n-hexano, HCl, NaCl, CH3CN

 

5. Pré-tratamento da amostra

Instruções
Os seguintes pontos devem ser tratados antes do pré-tratamento de qualquer tipo de amostra:
1) Somente as ponteiras descartáveis ​​podem ser utilizadas para os experimentos e as ponteiras devem ser trocadas quando utilizadas para absorção de reagentes diferentes;
2) Antes do experimento, cada utensílio experimental deve ser conferido quanto à limpeza e, se necessário, deve ser novamente limpo, a fim de evitar contaminação que interfira nos resultados experimentais.

Preparação de amostra
1) Extrato da amostra (armazenar a 2~8°C por 1 mês): Pegue 8,6 ml de HCl concentrado, adicione água deionizada a 500 ml e, em seguida, adicione 10 g de NaCl para obter o extrato da amostra.

5.1 Tecidos de gado e aves (frango, pato, porco):
1. Colocar 2± 0,05 g da amostra homogeneizada em tubo de centrífuga de 50ml;
2. Adicione 4 mL de extrato de amostra, agite vigorosamente por 1 minuto;
3. Adicione 4ml de acetato de etila e 2ml de CH3CN, agite bem por 10s;Centrifugue a 4000 r/min em temperatura ambiente (20 - 25 ℃) por 10 min (Nota: Esta etapa só precisa agitar por 10s, agitar muito tempo levará à emulsificação, se a emulsificação aparecer, pegue um certo sobrenadante e agite o tubo levemente por 5s , centrifugar novamente para obter sobrenadante suficiente);
4. Pegue 3 mL da fase orgânica da camada superior em um recipiente transparente, abaixo para secar com nitrogênio ou ar a
56℃banho de água;
5. Adicione 1ml de N-hexano, agite por 30s, então adicione 0,5ml de solução de redissolução, agite e misture bem por 30s;centrifugar a 4000 r/min em temperatura ambiente (20-25 ℃) por 5 min.
6. Remova a fase orgânica da camada superior. Retire 50 µL da camada inferior para análise.
Dobra de diluição da amostra:0,5

 

6. Procedimentos ELISA

6.1 Instruções
1) Leve todos os reagentes e tiras de micropoços à temperatura ambiente (20-25 ℃) antes de usar;
2) Devolva todos os reagentes a 2-8 ℃ imediatamente após o uso;
3) A reprodutibilidade da análise ELISA, em grande parte, depende da consistência da lavagem da placa.A correta operação de lavagem das placas é o ponto chave nos procedimentos de ELISA;
4) Para a incubação a temperaturas constantes, todas as amostras e reagentes devem evitar a exposição à luz, e cada microplaca deve ser selada pela membrana de cobertura.

6.2 Procedimentos de operação
1) Retire todos os reagentes necessários e coloque-os em temperatura ambiente (20-25 ℃) por pelo menos 30 minutos.Observe que cada reagente deve ser agitado para misturar uniformemente antes do uso;
2) Pegue as tiras de micropoços e os quadros de placa necessários.Selou novamente a microplaca não utilizada, armazenada a 2-8 ℃;
3) Preparo da solução: diluir 40 mL de tampão de lavagem concentrado 20× com água deionizada a 1:19 (1 parte de tampão de lavagem concentrado 20× + 19 partes de água deionizada), ou preparar na quantidade necessária;
4) Numeração: numerar os micropoços de acordo com as amostras e solução padrão;cada amostra e solução padrão deve ser realizada em duplicata;registrar suas posições;
5) Prepare a solução mista de solução de trabalho de anticorpo e conjugado de enzima concentrada: misture solução de trabalho de anticorpo e conjugado de enzima concentrada a 10:1 uniformemente (1000ul de solução de trabalho de anticorpo + 100ul de conjugado de enzima concentrada, esta solução de mistura deve ser usada uma vez preparada, não pode ser armazenado, a quantidade do pacote tem quantidade extra, prepare como a proporção está OK.)
6) Adicione 20 µL da amostra ou solução padrão para separar os poços duplicados e, em seguida, adicione 70 µL da solução mista de solução de trabalho de anticorpo e conjugado de enzima concentrada em cada poço.Misture agitando suavemente, sele a microplaca com a membrana de cobertura e incube a 25 ℃ no escuro por 30 min;
7) Lave a microplaca com o tampão de lavagem a 250 µL/poço por quatro a cinco vezes;mergulhe o poço com o tampão de lavagem por 15-30 seg, aba para secar com papel absorvente (se houver bolhas após o bater, corte-as com as pontas limpas);
8) Coloração: adicionar 50 µL da solução de substrato A e 50 µL da solução B em cada poço.Misture agitando suavemente e incube a 25 ℃ por 15 minutos no escuro para coloração;
9) Determinação: adicione 50 µL de solução de parada em cada poço.Misture agitando suavemente.Defina o comprimento de onda do leitor de microplacas em 450 nm para determinar o valor OD.(recomende ler o valor OD no comprimento de onda duplo 450/630 nm dentro de 5 min).

 

7. Julgamento do resultado

Existem dois métodos para julgar os resultados;o primeiro é o julgamento aproximado, enquanto o segundo é a determinação quantitativa.Observe que o valor de OD da amostra tem uma correlação negativa com o conteúdo de MQCA.

7.1 Determinação qualitativa
A faixa de concentração (ng/mL) pode ser obtida a partir da comparação do valor médio de DO da amostra com o da solução padrão.Assumindo que o valor de DO da amostra Ⅰ é 0,3 e o da amostra Ⅱ é 1,0, enquanto os valores das soluções padrão são os seguintes: 2,043 para 0 ppb, 1,716 para 0,5 ppb, 1,215 para 1,5 ppb, 0,74 para 4,5 ppb, 0,313 para 13,5 ppb e 0,155 para 40,5 ppb, portanto a faixa de concentração da amostraⅠ é de 13,5 a 40,5ppb, e a da amostra Ⅱ é de 1,5 a 4,5 ppb.

7.2 Determinação quantitativa
Os valores médios dos valores de absorbância são equivalentes à porcentagem do valor médio de DO (B) da amostra e da solução padrão dividido pelo valor de DO (B0) da primeira solução padrão (0 padrão) e posteriormente multiplicado por 100% , isso é,

 

Porcentagem do valor de absorbância =	B	×100%
	B0

 

 

B—o valor de OD médio (poços duplos) da amostra ou da solução padrão
B0 - o valor médio de OD da solução padrão de 0 ng/mL
Desenhe a curva padrão com as porcentagens de absorção das soluções padrão e os valores semilogaritmos das soluções padrão MQCA (ng/mL) como eixo Y e X, respectivamente.Leia a concentração correspondente da amostra da curva padrão incorporando sua porcentagem de absorção na curva padrão.O valor resultante é posteriormente multiplicado pela dobra de diluição correspondente, obtendo assim, finalmente, a concentração de MQCA na amostra.
Usar o software de análise profissional deste kit será mais conveniente para a análise precisa e rápida de uma grande quantidade de amostras.(Entre em contato conosco para este software)

 

8. Precauções

1. A temperatura ambiente abaixo de 25 ℃ ou a temperatura dos reagentes e as amostras não retornando à temperatura ambiente (20-25 ℃) levará a um valor de OD padrão mais baixo
2. O ressecamento da microplaca no processo de lavagem será acompanhado pelas situações que incluem as curvas padrão não lineares e a reprodutibilidade indesejável
3. Misture cada reagente e mistura de reação uniformemente e lave bem a microplaca, caso contrário, haverá reprodutibilidade indesejável
4. A solução de parada é a solução de ácido sulfúrico 2 M, evite o contato com a pele;
5. Coloque a microplaca não utilizada em um saco autovedante para fechá-la novamente.A substância padrão e o formador de cor incolor são sensíveis à luz e, portanto, não podem ser expostos diretamente à luz
6. Não use o kit fora do prazo de validade.O uso de reagentes diluídos ou adulterados dos kits levará a alterações na sensibilidade e nos valores de DO de detecção.Não troque os reagentes dos kits de lotes diferentes para uso
7. Descarte a solução de coloração com qualquer cor que indique a degeneração desta solução.O valor de detecção da solução padrão 0 de menos de 0,5 indica sua degeneração
8. A temperatura de reação ideal é de 25 ℃, e temperaturas muito altas ou muito baixas resultarão em mudanças na sensibilidade de detecção e nos valores OD.

 

9. Data de armazenamento e validade

Armazenamento: armazene a 2-8 ℃, não congelado.
Prazo de validade: 12 meses;a data de produção está na caixa.
Observação: Se a embalagem a vácuo da microplaca apresentar vazamento, ela ainda é válida para uso, não afeta o resultado do teste, pode ser usada com tranquilidade.

 

 

 

 

 

Q1: Quando será enviado?
A1: Enviaremos as mercadorias para você o mais rápido possível dentro de 7 dias úteis após o recebimento do pagamento.(No caso de fatores externos, como a epidemia, a entrega pode ser adiada)

 

Q2: Suporta OEM/ODM?
A2: Pode ser suportado, mas a quantidade específica precisa ser superior a 100.000 peças, o que é conveniente para produtos personalizados.

 

P3: como está sua fábrica em termos de controle de qualidade?
A3: Nós certificamos ISO9001 e ISO13485 a nível nacional.Nosso processo de produção está em conformidade com os procedimentos padrão para garantir a qualidade ideal do produto.

 

Q4: Como fornecer serviço pós-venda?
A4: fornecemos serviço pós-venda técnico online profissional.Podemos fornecer orientação individual por vídeo, telefone etc.

 

Q5: Qual é o método de pagamento?
A5: Recebemos o pagamento por T/T.

 

Q6: Como enviar?
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