Amantadine ELISA Kit For Chicken Pork Duck diagnóstica 96 Wells/Kit Sensitivity 0,2 Ppb

Kit de teste Amantadine ELISA para Frango Porco Pato 96 Poços/Kit Sensibilidade 0,2 ppb

 

1. Princípio

Este kit de teste é baseado no imunoensaio enzimático competitivo para a detecção de Amantadina.O antígeno de acoplamento é pré-revestido nas tiras do micropoço.A Amantadina na amostra e os antígenos de acoplamento pré-revestidos nas tiras dos micropoços competem pelos anticorpos anti-Amantadina.Após a adição do conjugado enzimático, o substrato TMB é adicionado para coloração.O valor da densidade óptica (DO) da amostra tem uma correlação negativa com a Amantadina na amostra.Este valor é comparado com a curva padrão e os resíduos de Amantadina são posteriormente obtidos.

 

2. Especificações técnicas

Sensibilidade: 0,2ppb
Temperatura da incubadora: 25 ℃
Tempo de incubação: 30min～15min

Limite de detecção:
Frango, pato 0,2 ppb

Taxa de reação cruzada:
Amantadina 100%

Taxa de recuperação:
Frango, pato 90±25%

 

3. Componentes

 

1	Tiras de micropoços	12 tiras com 8 poços removíveis cada
2	6 × solução padrão (1 mL cada)	0ppb	0,2 ppb
		0,8 ppb	3,2ppb
		12,8ppb	51,2ppb
3	conjugado enzimático	7ml	boné vermelho
4	Solução de trabalho de anticorpo	7ml	boné azul
5	Substrato A	7ml	boné branco
6	Substrato B	7ml	boné preto
7	Solução de parada	7ml	boné amarelo
8	Extrator	50ml*2	tampa transparente
9	20× tampão de lavagem concentrado	15ml	boné branco
10	5× solução de redissolução concentrada	10ml	boné branco

 

4. Materiais necessários, mas não fornecidos

 

1) Equipamento: Leitor ELISA (450 nm/630 nm), homogeneizador, agitador, centrífuga, balança: sensível à quantidade 0,01g, dispositivo de secagem com nitrogênio, incubadora, pipetas graduadas, impressora

2) Micropipetas: canal único 20ml ~ 200ml, 100ml ~ 1000ml, multicanal 30～300 μl

3) Reagentes: Acetonitrila, n-hexano.

 

5. Pré-tratamento da amostra

 

Instruções (Os seguintes pontos devem ser tratados antes do pré-tratamento)

1) Somente as ponteiras descartáveis ​​podem ser utilizadas para os experimentos e as ponteiras devem ser trocadas quando utilizadas para absorção de reagentes diferentes;

2) Antes do experimento, cada utensílio experimental deve ser limpo e deve ser re-limpado se necessário, a fim de evitar contaminação que interfira nos resultados experimentais.

 

Preparação da solução antes do pré-tratamento da amostra:

1) Solução de extrato de amostra

6 partes de acetonitrila + 1 parte de extrator para obter a solução de extrato de amostra pronta para uso.

2) Solução de redissolução de amostra

Use 1 parte de solução de redissolução concentrada (5X) e dissolva com 4 partes de água deionizada para obter a solução de redissolução de amostra pronta para uso.

Preparação de Amostras

 

5.1 Preparação de frango, amostra de pato

1) Pegue 3,0±0,05g de amostra de tecido homogeneizado em tubo de centrífuga de 50ml;adicione 6ml de solução de extrato de amostra, agite por 3min, centrifugue acima de 4000r/min em temperatura ambiente (20 - 25 ℃) por 5 min;

2) Pegue 2ml de fase orgânica transparente em um recipiente seco, sopre para secar com nitrogênio ou ar a 50~60 ℃;

3) Primeiro adicione 1ml de n-hexano, depois adicione 0,5ml da solução de redissolução da amostra, misture por 30s, centrifugue acima de 4000r/min em temperatura ambiente (20 - 25℃) por 5 min, descarte o n-hexano da camada superior;

4) Pegue 50μl de líquido da camada inferior para testar

Fator de diluição: 0,5

 

6. Procedimentos ELISA

 

6.1 Instruções

1. Deixe os reagentes ELISA atingirem a temperatura ambiente (20 - 25 °C) antes de usar.

2. Coloque os reagentes ELISA de volta a 2-8 ℃imediatamente após o uso

3. A reprodutibilidade do ELISA no processo de análise depende em grande parte da consistência da placa de lavagem, a operação correta da placa de lavagem é o ponto de determinação do programa ELISA

4. Em todo processo de incubação em temperatura constante, evite a exposição à luz, vede a microplaca com a membrana de cobertura

 

6.2 Procedimentos de operação

1. Leve o kit de teste à temperatura ambiente (20-25 ℃) por pelo menos 30 min, observe que cada reagente deve ser agitado uniformemente antes do uso;

2. Coloque as tiras de micropoços necessárias nas molduras das placas.Selou novamente a microplaca não utilizada, armazenada a 2-8 ℃, não congelada.

3. Preparação da solução: diluir 15ml de tampão de lavagem concentrado 20× com água desionizada para 300ml.

4. Numeração: numerar os micropoços de acordo com as amostras e solução padrão;cada amostra e solução padrão deve ser realizada em duplicata;registrar suas posições.

5. Adicionar padrão/amostra: Adicionar 50 µL da amostra ou da solução padrão em poços duplicados separados, depois adicionar conjugado enzimático, 50 µL/poço;então solução de trabalho de anticorpo, 50 µL/poço.Misture suavemente agitando a placa manualmente, sele a microplaca com a membrana de cobertura, incube a 25 °C por 30 min no escuro.

6. Lave a microplaca: Abra cuidadosamente a membrana da tampa, despeje o líquido do micropoço;adicione 250 µL/poço de tampão de lavagem diluído, lave totalmente por 4-5 vezes, 15-30 s de cada vez, depois retire e aba para secar com papel absorvente. (Use lança não utilizada para furar a bolha depois de seca)

7. Coloração: adicione 50 µL de solução de substrato A e depois 50 µL de solução B em cada poço.Misture delicadamente agitando a placa manualmente e incube a 25 °C por 15 minutos no escuro para coloração.

8. Determinação: adicione 50 µL da solução de parada em cada poço.Misture suavemente agitando a placa manualmente.Defina o comprimento de onda do leitor de microplacas em 450 nm para determinar o valor OD de cada poço.(Recomende ler o valor OD no comprimento de onda duplo 450/630 nm em 5 min).

 

7. Julgamento do resultado

Existem dois métodos para julgar os resultados;o primeiro é o julgamento aproximado, enquanto o segundo é a determinação quantitativa.Observe que o valor de DO da amostra tem uma correlação negativa com a Amantadina na amostra

7.1 Determinação qualitativa
A faixa de concentração (ng/ml) pode ser obtida comparando o valor médio da absorbância com os padrões.Suponha que o valor de absorbância da Amostra Um seja 0,3, da Amostra Dois seja 1,0 e os padrões sejam: 0ppb de 2,243;0,2ppb de 2,054;0,8ppb de 1,715;3,2ppb de 1,074;12,8ppb de 0,451;51,2 ppb de 0,155.Então a concentração da amostra está na faixa de 12,8ppb ~ 51,2ppb;A amostra dois é 3,2 ppb ~ 12,8 ppb.A faixa de concentração de Amantadina nas amostras pode ser obtida multiplicando-se pela diluição correspondente da amostra.
 

7. 2 Análise Quantitativa
Para calcular a concentração das amostras, uma curva padrão deve ser feita.Antes de fazer a curva padrão, o conceito de % de absorbância deve ser conhecido.
Cálculo da % de absorbância:

 

Porcentagem do valor de absorbância =	B	×100%
	B0

 

B—o valor médio de DO da amostra ou da solução padrão
B0 - o valor médio de OD da solução padrão de 0 ng/mL
O padrão zero é assim igualado a 100% e os valores de absorbância são expressos em porcentagens.Os valores calculados para os padrões são inseridos em um sistema de coordenadas em papel quadriculado semilogarítmico em relação à concentração de Amantadina [ng/mL].A concentração de Amantadine em ng/mL (ppb) correspondente à absorbância de cada amostra pode ser lida na curva de calibração.
Um software especial para análise de resultados de ELISA facilitará determinações duplas ou múltiplas.Se precisar, ligue para solicitar.

 

8. Precauções

 

1. O valor OD padrão será baixo se a temperatura ambiente for inferior a 25 ℃ ou a temperatura do reagente e a amostra não retornar à temperatura ambiente (20-25 ℃).
2. A microplaca é seca durante o processo de lavagem, que será acompanhada de não linearidade da curva padrão e baixa reprodutibilidade;portanto, prossiga para a próxima etapa imediatamente após a lavagem.
3. Misture bem antes de adicionar quaisquer reagentes.
4. A solução de parada é uma solução de ácido sulfúrico 2M, evite o contato com a pele.
5. Não use o kit após o prazo de validade.O uso de reagentes diluídos ou adulterados do kit pode resultar em alterações nos valores de sensibilidade e detecção de DO.Não substitua reagentes em lotes diferentes de kits.
6. Armazenamento: Conservar a 2-8°C, não congelar.Feche novamente as microplacas não utilizadas em sacos auto-vedantes.Materiais padrão e acopladores incolores são sensíveis à luz e não podem ser expostos diretamente à luz.
7. Descarte qualquer solução de tingimento cuja cor indique que a solução se degradou.O valor de detecção (450/630nm) de 0 solução padrão (0 ppb) é inferior a 0,5 ((A450nm<0,5)) indicando sua desnaturação.
8. A temperatura de reação ideal é 25℃.Se a temperatura estiver muito alta ou muito baixa, a sensibilidade de detecção e o valor OD mudarão.

 

9. Data de armazenamento e validade

Armazenamento: armazene a 2-8 ℃, não congelado.
Prazo de validade: 12 meses;a data de produção está na caixa.
Observação: Se a embalagem a vácuo da microplaca apresentar vazamento, ela ainda é válida para uso, não afeta o resultado do teste, pode ser usada com tranquilidade.

 

 

 

 

 

Q1: Quando será enviado?
A1: Enviaremos as mercadorias para você o mais rápido possível dentro de 7 dias úteis após o recebimento do pagamento.(No caso de fatores externos, como a epidemia, a entrega pode ser adiada)

 

Q2: Suporta OEM/ODM?
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