Sensibilidade diagnóstica 96Wells/Kit do Nitrofuran AMOZ 0.03ppb ELISA Kit For Milk Food Safety do camarão

Nitrofurano AMOZ Kit ELISA de diagnóstico para sensibilidade ao leite 0,03 ppb 96 poços/kit

 

1.Kit de diagnóstico ELISAPrincípio

Este kit de detecção é baseado em um imunoensaio enzimático competitivo para a detecção de AMOZ em amostras.Os antígenos conjugados são pré-revestidos em tiras de micropoços.O AMOZ na amostra compete com o antígeno conjugado pré-revestido na tira do micropoço pelo anticorpo anti-AMOZ.Após a adição do conjugado enzimático, o substrato TMB é adicionado para coloração.O valor da densidade óptica (OD) de uma amostra é negativamente correlacionado com o AMOZ nela.Este valor é comparado a uma curva padrão e a concentração de AMOZ é posteriormente obtida.

 

2. Especificações técnicas

 

Sensibilidade: 0,03ppb

Temperatura de incubação: 25 ℃

Tempo de incubação: 30min~15min

Limite de detecção Tecido, ovo, mel: 0,1ppb

Taxa de reação cruzada

AMOZ 100%

AHD < 0,1%

AOZ < 0,1%

SEM < 0,1%

Taxa de recuperação

Tecido 80 ± 25%

Mel 75 ± 25%

Ovo 95 ± 25%

 

3.Nitrofurano AMOZ ELISA Kit de teste de segurança alimentarComponentes

 

1	Tiras de micropoços	12 tiras com 8 removíveis poços cada
2	6 × solução padrão (1 mL cada)	0ppb	0,03ppb
		0,09ppb	0,27 ppb
		0,81ppb	2,43ppb
3	conjugado enzimático	7ml	boné vermelho
4	Solução de trabalho de anticorpo	7ml	boné azul
5	Substrato A	7ml	boné branco
6	Substrato B	7ml	boné preto
7	Solução de parada	7ml	boné amarelo
8	20× tampão de lavagem concentrado	40ml	boné branco
9	2× solução de redissolução concentrada	50ml	tampa transparente
10	2-Nitrobenzaldeído (C7H5NO3)	2-Nitrobenzaldeído (C7H5NO3)	2-Nitrobenzaldeído (C7H5NO3)

 

 

4. Materiais necessários, mas não fornecidos
1) Equipamento: leitor de microplacas, impressora, homogeneizador, secador de nitrogênio, vortexer, centrífuga, tubo medidor, balança (recíproco 0,01g), incubadora, banho-maria;
2) Micropipetas: canal único 20-200µL, 100-1000µL, multicanal 30-300µl;
3) Reagentes: NaOH, acetato de etila, n-hexano, HCl (cerca de 36,5%), K2HPO4 3H2O

5. Preparação de amostras

instruir
Os seguintes pontos devem ser abordados antes de qualquer tipo de pré-tratamento da amostra:
1) O experimento só pode utilizar ponteiras descartáveis, devendo as ponteiras serem substituídas quando da aspiração de reagentes diferentes;
2) Antes do experimento, cada equipamento experimental deve ser limpo e re-limpado se necessário para evitar contaminação que interfira nos resultados experimentais.

Preparação da solução antes do pré-tratamento da amostra:
1) K2HPO4 0,1 M: Dissolva 11,4 g de K2HPO4 3H2O em água deionizada para 500 mL.
2) HCl 1 M: Dissolva 8,6 mL de HCl (cerca de 36,5%) em água deionizada para 100 mL.
3) NaOH 1 M: Dissolva 4 g de NaOH em água deionizada para 100 mL.
4) Dilua a solução de redissolução concentrada 2× com água deionizada a 1:1 (1 mL de solução de redissolução concentrada + 1 mL de água deionizada) para redissolução da amostra.

 

5.1 Preparação da amostra

a)Tecido, ovos
1) Pesar 1±0,05g de amostra homogênea, adicionar 4mL de água destilada, 0,5mL de HCl 1M e 100µL de 2-nitrobenzaldeído (C7H5NO3) em cada tubo e agitar adequadamente por 2 minutos;
2) Incube durante a noite a 37°C (cerca de 16 horas) ou em banho-maria a 56°C (2 horas).
3) Adicione 5mL de K2HPO4 0,1M, 0,4mL de NaOH 1M e 6mL de acetato de etila a cada tubo e agite por 30 segundos.
4) Centrifugar em temperatura ambiente (20-25°C) acima de 4000r/min por 10min (se houver emulsificação ou a camada de acetato de etila for menor que 3ml, incubar a amostra em banho-maria a 80°C por 10min, e centrifugar repetidamente; ou aumentar a velocidade e prolongar o tempo de centrifugação).
5) Transfira a camada de 3 mL de acetato de etila para um novo tubo de centrífuga e evapore até a secura com nitrogênio ou ar a 50°C.
6) Dissolva o resíduo seco em 2 mL de n-hexano, adicione 1 mL da solução reconstituída diluída, misture bem por 30 segundos, centrifugue à temperatura ambiente (20-25°C) a uma velocidade superior a 4000 rpm por 10 minutos;remover a fase superior n-hexano.(Se ocorrer emulsificação, remova a fase superior de n-hexano, incube a amostra em banho-maria a 70°C por 10 a 20 minutos e centrifugue repetidamente).
7) Pegue 50 µL da camada inferior para análise.
Fator de diluição da amostra: 2

b) mel
1) Pesar 2±0,05g de amostra homogênea (mel), adicionar 4mL de água destilada, 0,5mL de HCl 1 M e 100 µL de 2-nitrobenzaldeído (C7H5NO3) em cada tubo, agitar adequadamente por 2 minutos;
2) Incube durante a noite a 37°C (cerca de 16 horas) ou em banho-maria a 56°C (2 horas).
3) Adicione 5mL de K2HPO4 0,1M, 0,4mL de NaOH 1M e 6mL de acetato de etila a cada tubo e agite por 30 segundos.
4) Centrifugar em temperatura ambiente (20-25°C) acima de 4000r/min por 10min (se houver emulsificação ou a camada de acetato de etila for inferior a 3ml, centrifugar a amostra repetidamente em banho-maria a 80°C por 10min; ou aumentar a velocidade e prolongar o tempo de centrifugação).
5) Transfira a camada de 3 mL de acetato de etila para um novo tubo de centrífuga e evapore até a secura com nitrogênio ou ar a 50°C.
6) Dissolva o resíduo seco em 2 mL de n-hexano, adicione 1 mL da solução reconstituída diluída, misture bem por 30 segundos, centrifugue à temperatura ambiente (20-25°C) a uma velocidade de 4000 r/min ou mais por 10 minutos;remover a fase superior n-hexano.(Se ocorrer emulsificação, remova a fase superior de n-hexano, incube a amostra em banho-maria a 70°C por 10 a 20 minutos e centrifugue repetidamente).
7) Pegue 50 µL da camada inferior para análise.
Fator de diluição da amostra: 1

 

 

6. Procedimento ELISA

6.1 Descrição
1) Leve todos os reagentes e tiras de micropoços à temperatura ambiente (20-25°C) antes de usar;
2) Coloque todos os reagentes de volta a 2-8°C imediatamente após o uso;
3) A reprodutibilidade dos ensaios ELISA depende em grande parte da consistência da lavagem da placa.A operação correta de lavagem da placa é a chave para o procedimento ELISA;
4) Durante a incubação em temperatura constante, todas as amostras e reagentes devem ser protegidos da luz, e cada microplaca deve ser selada com um filme de cobertura.

6.2 Procedimento Operacional
1) Coloque o kit em temperatura ambiente (20-25°C) por pelo menos 30 minutos, observe que cada reagente deve ser agitado e bem misturado antes do uso e coloque as tiras de micropoços necessárias na estrutura da placa.As microplacas não utilizadas devem ser fechadas novamente e armazenadas entre 2-8°C, não congeladas.
2) Preparação da solução: 40 mL de tampão de lavagem concentrado 20 × diluído 1:19 com água desionizada (1 parte de tampão de lavagem concentrado 20 × + 19 partes de água desionizada).Ou prepare conforme necessário.
3) Numeração: Numerar os micropoços de acordo com as amostras e soluções padrão;cada amostra e solução padrão deve ser feita em duplicata e suas posições registradas.
4) Adicione 50µL de amostra ou solução padrão para separar os poços replicados;adicione 50ul de conjugado enzimático a cada poço, depois adicione 50µl de solução de trabalho de anticorpo e agite a placa manualmente para misturar suavemente.Selar a microplaca com uma película de cobertura e incubar a 25°C durante 30 minutos.
5) Despeje o líquido no micropoço, seque em papel absorvente, adicione 250 µL/poço de tampão de lavagem para lavar a placa do micropoço por 15 a 30 segundos, depois remova e seque com papel absorvente, repita 4 a 5 vezes.(Se houver bolhas de ar após o toque, corte-as com uma ponta limpa).
6) Revelação da cor: Adicione 50 µL de Substrato A a cada poço, seguido de 50 µL de Substrato B. Misture suavemente agitando a placa manualmente e incube no escuro a 25 °C por 15 minutos para desenvolver a cor.
7) Ensaio: Adicione 50 μL de solução de parada a cada poço.Misture delicadamente agitando a placa com a mão.Defina o comprimento de onda do leitor de microplacas para 450 nm para determinar o valor OD de cada poço.(Recomenda-se ler os valores OD em comprimentos de onda duplos 450/630 nm em 5 minutos).

 

7. Julgamento do resultado

 

Existem dois métodos para julgar os resultados: o primeiro é o julgamento aproximado, enquanto o segundo é a determinação quantitativa.Observe que o valor de OD da amostra tem uma correlação negativa com a concentração de AMOZ.

7.1 Determinação qualitativa

A faixa de concentração (ng/mL) de AMOZ pode ser obtida comparando-se o valor médio de DO da amostra com o da solução padrão.Supondo que o valor de DO da amostraⅠ seja 0,3 e o da amostraⅡ seja 1,0, o valor de DO das soluções padrão é: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 0,03ppb, 1,415 para 0,09ppb, 0,74 para 0,27ppb, 0,313 para 0,81ppb , 0,155 para 2,43ppb, portanto, a faixa de concentração da amostraⅠ é de 0,81 a 2,43ppb, e a da amostraⅡ é de 0,09 a 0,27ppb.

7.2 Determinação quantitativa

Os valores médios dos valores de absorbância são obtidos para o valor médio de DO (B) da amostra e da solução padrão dividido pelo valor de DO (B0) da primeira solução padrão (0 padrão) e posteriormente multiplicado por 100%, ou seja ,

Porcentagem do valor de absorbância =	B	×100%
	B0

B—o valor médio de DO da amostra ou da solução padrão

B0 - o valor médio de OD da solução padrão de 0 ng/mL

Desenhe a curva padrão com as porcentagens de absorção da solução padrão e os valores semilogaritmos da solução padrão AMOZ (ng/mL) como eixo Y e X, respectivamente.Leia a concentração correspondente da amostra da curva padrão incorporando sua porcentagem de absorção na curva padrão.O valor resultante é posteriormente multiplicado pela dobra de diluição correspondente, obtendo-se finalmente a concentração de AMOZ na amostra.

 

8. Assuntos que precisam de atenção
1) A temperatura ambiente é inferior a 25 ℃ ou a temperatura do reagente e a amostra não retornaram à temperatura ambiente (20-25 ℃), o que fará com que o valor OD padrão diminua.
2) Durante o processo de lavagem, a secagem da microplaca será acompanhada pela não linearidade da curva padrão e pela reprodutibilidade insatisfatória;portanto, prossiga para a próxima etapa imediatamente após a lavagem.
3) Misture bem, caso contrário haverá baixa reprodutibilidade.
4) A solução de parada é uma solução de ácido sulfúrico 2 M, evite o contato com a pele.
5) Não use o kit fora do prazo de validade.O uso de reagentes diluídos ou adulterados do kit pode resultar em alterações nos valores de sensibilidade e detecção de DO.Não substitua reagentes de diferentes lotes de kits.
6) Sele novamente as microplacas não utilizadas em sacos autovedantes.Soluções padrão e acopladores incolores são sensíveis à luz e não podem ser expostos diretamente à luz.
7) Descarte qualquer solução de tingimento cuja cor indique que a solução se degradou.Um valor de detecção inferior a 0,5 para a solução padrão 1 (0 ppb) indica degradação.
8) A temperatura de reação ideal é de 25 ℃, e a sensibilidade de detecção e o valor OD mudarão se a temperatura for muito alta ou muito baixa.
 

9. Período de armazenamento e validade
Armazenamento: Conservar a 2-8°C, não congelar.
Prazo de validade: 12 meses;a data de produção está na caixa.
Observação: Se a embalagem a vácuo da microplaca vazar, ela ainda pode ser usada sem afetar os resultados do teste, portanto, você pode usá-la com confiança.

 

 

Q1: Quando será enviado?
A1: Enviaremos as mercadorias para você o mais rápido possível dentro de 7 dias úteis após o recebimento do pagamento.(No caso de fatores externos, como a epidemia, a entrega pode ser adiada)

 

Q2: Suporta OEM/ODM?
A2: Pode ser suportado, mas a quantidade específica precisa ser superior a 100.000 peças, o que é conveniente para produtos personalizados.

 

P3: como está sua fábrica em termos de controle de qualidade?
A3: Nós certificamos ISO9001 e ISO13485 a nível nacional.Nosso processo de produção está em conformidade com os procedimentos padrão para garantir a qualidade ideal do produto.

 

Q4: Como fornecer serviço pós-venda?
A4: fornecemos serviço pós-venda técnico online profissional.Podemos fornecer orientação individual por vídeo, telefone etc.

 

Q5: Qual é o método de pagamento?
A5: Recebemos o pagamento por T/T.

 

Q6: Como enviar?
A6: Escolha o melhor método de envio para você, obtendo cotações de nossas muitas transportadoras cooperativas e também envie de acordo com suas necessidades.