O teste Kit ELISA Aflatoxin Testing Equipment For do amendoim do T-2 de Trichothecenes alimenta o arroz 3ppb

Jogo do teste de Trichothecenes (T-2) ELISA para o arroz 96 Wells/jogo do amendoim da alimentação

 

1. Princípio

Este jogo do teste é baseado no immunoassay competitivo da enzima para a detecção de Trichothecenes (T-2). O antígeno de acoplamento é pré-revestido nas micro-bem listras. O Trichothecenes (T-2) na amostra e os antígenos de acoplamento pré-revestidos nas micro-bem listras competem para os anti anticorpos de Trichothecenes (T-2). Depois que a adição do conjugado da enzima, a carcaça de TMB é adicionada para a coloração. O valor da densidade ótica (OD) da amostra tem uma correlação negativa com o Trichothecenes (T-2) na amostra. Este valor é comparado à curva padrão e os resíduos de Trichothecenes (T-2) são obtidos subseqüentemente.

 

2. Especificações técnicas

Sensibilidade: 0,05 ppb
Temperatura da incubadora: 25℃
Tempo da incubadora: 30min~15min
Limite de detecção:
Alimentação, amendoim, arroz 3ppb
Taxa da reação cruzada:
Trichothecenes (T-2) 100%
Taxa de recuperação:
Alimentação, arroz 90±25%
Amendoim 85±25%

 

3. Componentes

 

1	Micro-bem tiras	12 tiras com os 8 poços removíveis cada
2	solução 6× padrão (1 mL cada um)	0ppb	0.05ppb
		0.15ppb	0.45ppb
		1.35ppb	4.05ppb
3	Conjugado da enzima	7ml	tampão vermelho
4	Solução de funcionamento do anticorpo	7ml	tampão azul
5	Carcaça A	7ml	tampão branco
6	SubstrateB	7ml	tampão preto
7	Pare a solução	7ml	tampão amarelo
8	20× concentrou o amortecedor de lavagem	15ml	tampão branco
9	5× concentrou redissolving a solução	50ml*2	tampão transparente

 

4. Materiais exigidos mas não fornecidos

1) Equipamento: ELISA Reader (450 nm/630nm), homogenizador, abanador, centrifugador, equilíbrio: 0.01g quantidade sensível, dispositivo da nitrogênio-secagem, incubadora, pipeta graduadas, impressora
2) Micropipettes: monocanal 20ml ~ 200ml, 100ml ~ 1000ml, μl do multi-canal 30~300
3) Reagentes: Metanol.

5. Pré-tratamento da amostra

Instruções (os seguintes pontos devem ser tratados antes do pré-tratamento)
1) Somente as pontas descartáveis podem ser usadas para as experiências e as pontas devem ser mudadas quando usadas para absorver reagentes diferentes;
2) Antes da experiência, cada utensílio experimental deve estar limpo e deve re-ser limpado caso necessário, a fim evitar a contaminação que interfere com os resultados experimentais.

Preparação da solução antes do pré-tratamento da amostra:
1) Solução de Sampleredissolving
Use de 1 partes (5X) do concentrado redissolving a solução e para dissolver-se com o de 4 partes da água deionized para obter a amostra pronto para uso que redissolving a solução.
2) Solução do extrato de amostra
Use de 1 partes do metanol e dissolva-o com a 1 porção da amostra que redissolving a solução para obter a solução pronto para uso do extrato de amostra.
Preparação da alimentação, amendoim, amostra do arroz

1) A tomada 1.0±0.05g grinded a amostra no tubo de centrifugador 50ml, adiciona a solução do extrato de amostra 5ml, agitação para 3min, centrifugador acima de 4000r/min em 20℃ para o minuto 10;
2) Tome o supernatant 100ul (acima-camada), adicione a amostra 400ul que redissolving a solução, agite-à uniformemente;
3) Tome 50μl para testar
Fator da diluição: 25

 

6. Procedimentos de ELISA

6,1 instruções

1) Traga reagentes de ELISA à temperatura ambiente (20 - °C) 25 antes de usar.
2) Reagentes postos de ELISA de volta ao ℃ 2-8 imediatamente depois do uso
3) A reprodutibilidade de ELISA no processo da análise é depende pela maior parte da consistência da placa de lavagem, a operação de lavagem correta da placa é o ponto do programa da determinação ELISA
4) Em todo o processo de incubação da temperatura constante, evite a exposição à luz, selo o microplate com a membrana da tampa.

6. 2 procedimentos da operação

1) Traga o jogo do teste ao minuto 30 da temperatura ambiente (℃ 20-25) no mínimo, note que cada reagente deve ser agitado uniformemente antes de usar;
2) Põe as micro-bem tiras exigidas em quadros da placa. Re-selou o microplate não utilizado, armazenado no ℃ 2-8, não congelado.
3) Preparação da solução: tome o amortecedor concentrado 20× da lavagem 15ml, dissolva-o com água deionized no 1:19 (amortecedor concentrado 20× de 1 partes da lavagem + 19 porções da água deionized), ou prepare-o como a quantidade necessária.
4) Numeração: número os micro-poços de acordo com amostras e a solução padrão; cada amostra e solução padrão devem ser executadas em duplicado; grave suas posições.
5) Adicione o padrão/amostra: Adicione o µL 50 da amostra ou a solução padrão em poços duplicados separados, a seguir adicione o conjugado da enzima, 50 µL/well; então solução de funcionamento do anticorpo, 50 µL/well. Misture delicadamente agitando a placa manualmente, selo o microplate com a membrana da tampa, incube o °C at25 para o minuto 30 na obscuridade.
6) Microplate da lavagem: Abra com cuidado o membrance da tampa, derramam o líquido fora do microwell; adicione 250 µL/well do amortecedor da lavagem, lave-os inteiramente por 4-5 vezes, 15-30 s cada vez, a seguir remova-os e bata-os para secar com papel absorvente. (Use lança não utilizada para perfurar a bolha após seco)
7) Coloração: adicione o µL 50 da solução da carcaça A então solução de 50 µL B em cada poço. Misture delicadamente agitando a placa manualmente, °C do andincubate at25 para 15minin a obscuridade para a coloração.
8) Determinação: adicione 50 que o µL do para a solução em cada poço. Misture delicadamente agitando a placa manualmente. Ajuste o comprimento de onda do leitor do microplate em 450 nanômetro para determinar o valor do OD de cada poço. (Recomende ler o valor do OD no duplo-comprimento de onda 450/630 de nanômetro dentro do minuto 5).

 

7. Julgamento do resultado

Há dois métodos para julgar os resultados; primeiro é o julgamento áspero, quando o segundo for a determinação quantitativa. Nota que o valor do OD da amostra tem uma correlação negativa com o Trichothecenes (T-2) na amostra
7,1 determinação qualitativa
A escala de concentração (ppb) pode ser obtida pelo comparado o valor médio da absorvência com os padrões. Supõe que valor da absorvência da amostra uma é 0,3, a amostra dois é 1,0, e os padrões são: 0ppb de 2,243; 0.05ppb de 1,816; 0.15ppb de 1,415; 0.45ppb de 0,74; 1.35ppb de 0,313; 4.05ppb de 0,155. Então a concentração da amostra uma está na escala de 1.35ppb ~ 4.05ppb; A amostra dois é 0.15ppb ~ 0.45ppb. A escala de concentração de Trichothecenes (T-2) nas amostras pode ser obtida pelo multiplicado pela diluição correspondente da amostra.
7. análise 2 quantitativa
A fim calcular a concentração de amostras, uma curva padrão deve ser feita. Antes que a curva padrão esteja feita, o conceito de % da absorvência deve ser saber.
Cálculo de % da absorvência:

 

Porcentagem do valor da absorvência =	B	×100%
	B0

 

Valor do OD da média de B-the da amostra ou da solução padrão
Valor do OD da média de B0-the das 0 soluções padrão de ng/mL
O padrão zero é feito assim igual a 100% e os valores da absorvência são citados nas porcentagens. Os valores calcularam para os padrões são entrados em um sistema de coordenadas no papel de gráfico semilogarithmic contra o a concentração de Trichothecenes (T-2) [ng/mL]. A concentração de Trichothecenes (T-2) em ng/mL que corresponde à absorvência de cada amostra pode ser lida da curva de calibração.
Um software especial para a análise do resultado de ELISA facilitará determinações dobro ou múltiplas. Se você precisa, chame por favor para pedir.

 

8. Precauções
1) A temperatura ambiente abaixo do ℃ 25 ou a temperatura dos reagentes e das amostras que não estão sendo retornados à temperatura ambiente (℃ 20-25) conduzirão a um valor padrão mais baixo do OD.
2) A seca do microplate no processo de lavagem será acompanhada das situações que incluem as curvas padrão não-lineares e a reprodutibilidade indesejável; Continue assim ao passo seguinte imediatamente depois da lavagem.
3) Misture uniformemente antes de adicionar algum reagente.
4) A solução da parada é a solução ácida sulfúrica de 2 M, evita contactar com a pele.
5) Não use o jogo que excede sua data de expiração. O uso de reagentes diluídos ou adulterados dos jogos conduzirá às mudanças na sensibilidade e nos valores de detecção do OD. Não troque os reagentes dos jogos de números de lote diferentes para usar-se.
6) Armazenamento: loja no ℃ 2-8, não congelado. Põe o microplate não utilizado em um saco da auto-selagem ao re-selo ele. A substância padrão e a cor incolor anteriores são sensíveis à luz, e assim não pode diretamente ser exposta à luz.
7) Rejeite a solução da coloração com toda a cor que indicar a degeneração desta solução. O valor de detecção (450/630nm) das 0 soluções padrão (0 ppb) de menos de 0,5 ((A450nm<0> 8) a temperatura a melhor da reação é 25℃, e as temperaturas demasiado altas ou demasiado baixas conduzirão às mudanças na sensibilidade de detecção e em valores do OD.

 

9. Data do armazenamento e de expiração
Armazenamento: loja no ℃ 2-8, não congelado.
Data de expiração: 12 meses; a data da produção está na caixa.
Nota: Se o pacote do vácuo do microplate tem o escapamento, é ainda válido usar-se, não afeta o resultado da análise, seja relaxar para usar-se.

 

 

 

 

 

 

 

 

Q1: Quanto tempo tomará para que você envie?
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