Nitrofuran SEM ELISA Food Safety Test Kit para a sensibilidade 0.02ppb 96Wells/Kit do leite

Nitrofuran SEM ELISA Food Safety Test Kit para a sensibilidade 0.02ppb 96Wells/Kit do leite

 

1. Princípio de SEM ELISA Food Safety Test Kit do Nitrofuran

 

Este jogo do teste é baseado no immunoassay competitivo da enzima para a detecção de Nitrofuran (SEM) na amostra. Os antígenos de acoplamento são pré-revestidos nas micro-bem listras. O Nitrofuran (SEM) na amostra e os antígenos de acoplamento pré-revestidos nas micro-bem listras competem para os anticorpos de anti-SEM. Depois que a adição do conjugado da enzima, a carcaça de TMB é adicionada para a coloração. O valor da densidade ótica (OD) da amostra tem uma correlação negativa com SEM nele. Este valor é comparado à curva padrão e a concentração de SEM é obtida subseqüentemente.

 

2. Especificações técnicas

 

Sensibilidade: 0.02ppb

Temperatura da incubação: 25℃

Tempo da incubação: 30min~15min

Tecido do limite de detecção, ovo, mel: 0.1ppb

Taxa da reação cruzada

SEM 100%

AMOZ < 0="">

AOZ < 0="">

AHD < 0="">

Taxa de recuperação

Tecido 75±25%

Mel 70±20%

Ovo 95±25%

 

3. Componentes de SEM ELISA Food Safety Test Kit do Nitrofuran

 

1	Micro-bem tiras	12 tiras com os 8 removíveis poços cada
2	solução 6× padrão (1 mL cada um)	0ppb	0.02ppb
		0.06ppb	0.18ppb
		0.54ppb	1.62ppb
3	Conjugado da enzima	7ml	tampão vermelho
4	Solução de funcionamento do anticorpo	7ml	tampão azul
5	Carcaça A	7ml	tampão branco
6	SubstrateB	7ml	tampão preto
7	Pare a solução	7ml	tampão amarelo
8	20× concentrou o amortecedor de lavagem	40ml	tampão branco
9	2× concentrou redissolving a solução	50ml	tampão transparente
10	2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3)	10ml	tampão preto

 

4. Materiais exigidos mas não fornecidos

 

1) Equipamentos: o leitor do microplate, impressora, homogenizador, dispositivo da nitrogênio-secagem, redemoinho, centrifugador, medindo introduz com pipeta, o equilíbrio (uma sensibilidade recíproca de 0,01 g), incubadora, banho maria;

2) Micropipettors: monocanal 20-200µL, 100-1000µL, e multi-canal 30~300µl;

3) Reagentes: NaOH, acetato de etilo, n-hexano, HCI (36,5% aproximados), K2HPO4·3H2O.

 

5. Pré-tratamento da amostra

 

Instruções

Os seguintes pontos devem ser tratados antes do pré-tratamento do tipo da amostra:

1) Somente as pontas descartáveis podem ser usadas para as experiências e as pontas devem ser mudadas quando usadas para absorver reagentes diferentes;

2) Antes da experiência, cada equipamento experimental deve estar limpo e deve re-ser limpado caso necessário, a fim evitar a contaminação que interfere com os resultados experimentais.

Preparação da solução antes do pré-tratamento da amostra:

1) 0,1 M K2HPO4: dissolva g 11,4 K2HPO4·3H2O na água deionized a 500mL.

2) 1 M HCl: dissolva 8.6mL HCI (36,5% aproximados) na água deionized a 100mL.

3) NaOH de 1 M: dissolva NaOH 4g na água deionized a 100mL.

4) o 2×concentrated que redissolving a solução é diluído com água deionized no 1:1 (1mL concentrou redissolving a solução + a água deionized 1mL), usado para redissolving da amostra.

 

5,1 preparação das amostras

a) Tecido, ovo

1) Pese 1± 0.05g da amostra homogeneizada, adicione 4mL da água destilada, 0.5mL 1 M HCI e 100µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) a cada tubo, agitam corretamente para 2min;.

2) Incube o ℃ at37 sobre a noite (horas approx16) ou incube at56℃ pelo banho maria (2 horas).

3) Adicione o acetato de etilo 5mL 0.1M K2HPO4, NaOH de 0.4mL 1M e 6mL a cada tubo, agitação para 30s.

4) Centrifugador em 4000r/min acima na temperatura ambiente (℃ 20-25) para 10min (se há uma emulsificação ou camada do acetato de etilo não é bastante para 3ml, não incubam a amostra no banho maria 80℃ para 10min e centrifugador repetidamente; ou aumente a velocidade e estenda a época do centrifugador).

5) Transferência 3mL da camada do acetato de etilo em um tubo centrífugo novo e para evaporar a seco pelo nitrogênio ou pelo ar em 50℃.

6) Dissolva os resíduos secos no N-hexano 2mL, adicione 1mL da solução redissolving diluída, mistura corretamente por 30 segundos, centrifugador acima de 4000 r/min na temperatura ambiente (℃ 20-25) para o minuto 10; Remova a fase do N-hexano da acima-camada (se há uma emulsificação, após ter removido a fase do N-hexano da acima-camada, incubam a amostra no banho maria 70℃ para 10-20min, centrifugam-na repetidamente).

7) Tome a 50 o µL do mais baixo para a análise.

Dobra da diluição da amostra: 2

b) Mel

1) Pese 2± 0.05g da amostra homogeneizada (mel), adicione 4mL da água destilada, 0.5mL 1 M HCI e 100 o µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) a cada tubo, agita corretamente para 2min;.

2) Incube o ℃ at37 sobre a noite (horas approx16) ou incube at56℃ pelo banho maria (2 horas).

3) Adicione o acetato de etilo 5mL 0.1M K2HPO4, NaOH de 0.4mL 1M e 6mL a cada tubo, agitação para 30s.

4) Centrifugador em 4000r/min acima na temperatura ambiente (20-25℃) para 10min (se há uma emulsificação ou camada do acetato de etilo não é bastante para 3ml, não incubam a amostra no banho maria 80℃ para 10min e centrifugador repetidamente; ou aumente a velocidade e estenda a época do centrifugador).

5) Transferência 3mL da camada do acetato de etilo em um tubo centrífugo novo e para evaporar a seco pelo nitrogênio ou pelo ar no ℃ 50.

6) Dissolva os resíduos secos no N-hexano 2mL, adicione 1mL da solução redissolving diluída, mistura corretamente por 30 segundos, centrifugador acima de 4000r/min na temperatura ambiente (℃ 20-25) para o minuto 10; Remova a fase do N-hexano da acima-camada (se há uma emulsificação, após ter removido a fase do N-hexano da acima-camada, incubam a amostra no banho maria 70℃ para 10-20min, centrifugam-na repetidamente).

7) Tome a 50 o µL do mais baixo para a análise.

Dobra da diluição da amostra: 1

 

6. Procedimentos de ELISA

 

6,1 instruções

1) Traga todos os reagentes e micro-bem tiras à temperatura ambiente (℃ 20-25) antes de usar;

2) Retorne todos os reagentes ao ℃ 2-8 imediatamente depois do uso;

3) A reprodutibilidade da análise de ELISA, em grande parte, depende da consistência da lavagem da placa. A operação correta do lavagem da placa é o ponto-chave em ELISA os procedimentos;

4) Para a incubação em temperaturas constantes, todas as amostras e reagentes devem evitar a exposição à luz, e cada microplate deve ser selado pela membrana da tampa.

 

6,2 procedimentos da operação

1) Põe o jogo na temperatura ambiente (20-25°C) no mínimo 30 minutos, notam que cada reagente deve ser agitado e misturado bem antes de usar, e põem as tiras exigidas do microwell no quadro da placa. Os microplates não utilizados devem ser resealed e armazenado em 2-8°C, não congelado.

2) Preparação da solução: A tomada 40 mL de 20× concentrou o amortecedor de lavagem e dilui-o com água deionized no 1:19 (de 1 partes do amortecedor concentrado 20× da lavagem + 19 porções da água deionized). Ou prepare como necessário.

3) Numeração: Numere os microwells de acordo com as amostras e as soluções padrão; cada amostra e solução padrão devem ser feitas em duplicado, e suas posições devem ser gravadas.

4) Adicione 50µL da amostra ou da solução padrão para duplicar poços; adicione 50ul do conjugado da enzima a cada poço, adicione então 50µL da solução de trabalho do anticorpo, e agite a placa para misturar delicadamente. Sele o microplate com um filme da tampa e incube-o em 25°C para 30min.

5) Derrame para fora o líquido nos microwells, pancadinha seca no papel absorvente, adicione 250 μL/well do amortecedor de lavagem para lavar a placa do microwell por 15-30s, a seguir remova-os e a pancadinha seca com papel absorvente, repete 4-5 vezes. (Se há umas bolhas de ar após a batida, os cortou fora com uma ponta limpa).

6) Desenvolvimento da cor: Adicione o µL 50 o µL da carcaça A e 50 da carcaça B a cada poço. Agite a placa à mão para misturar delicadamente e incubar em 25°C para o minuto 15 na obscuridade para o desenvolvimento da cor.

7) Ensaio: Adicione o μL 50 da solução da parada a cada poço. Misture delicadamente agitando a placa à mão. Ajuste o comprimento de onda do leitor do microplate a 450 nanômetro para determinar o valor do OD de cada poço. (Se recomenda ler o valor do OD no comprimento de onda duplo 450/630nm dentro de 5 minutos).

 

7. Julgamento do resultado

 

Há dois métodos para julgar os resultados: primeiro é o julgamento áspero, quando o segundo for a determinação quantitativa. Nota que o valor do OD da amostra tem uma correlação negativa com o índice de SEM.

7,1 determinação qualitativa

A escala de concentração (ng/mL) pode ser obtida de comparar o valor médio do OD da amostra com o aquele da solução padrão. Supor que o valor do OD da amostraⅠ é 0,3, e aquele do Ⅱ da amostra é 1.0ppb, o valor do OD de soluções padrão é: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 0.02ppb, 1,415 para 0.06ppb, 0,74 para 0.18ppb, 0,313 para 0.54ppb, 0,155 para 1.62ppb, em conformidade a escala de concentração do Ⅰ da amostra são 0,54 a 1.62ppb, e aquele do Ⅱ da amostra é 0,06 a 0.18ppb.

7,2 determinação quantitativa

Os valores médios dos valores da absorvência são obtidos para o valor médio do OD (b) da amostra e da solução padrão divididas pelo valor do OD (B0) da primeira solução padrão (0 padrões) e multiplicadas subseqüentemente em 100%, isto é,

Porcentagem do valor da absorvência =	B	×100%
	B0

Valor do OD da média de B-the (poços dobro) da amostra ou da solução padrão

Valor do OD da média de B0-the da solução 0ng/mL padrão

Tire a curva padrão com as porcentagens da absorção da solução padrão e os valores do semilogarithm da solução padrão de SEM (ng/mL) como o y e a X-linha central, respectivamente. Leia a concentração correspondente da amostra da curva padrão incorporando sua porcentagem da absorção na curva padrão. O valor resultante é multiplicado subseqüentemente pela dobra correspondente da diluição, obtendo finalmente a concentração de SEM na amostra.

 

8. Precauções

 

1) Se a temperatura ambiente é mais baixa do que 25℃ ou a temperatura do reagente e a amostra não retornam à temperatura ambiente (20-25℃), o valor padrão do OD deixará cair.

2) Durante o processo de lavagem, a secagem do microplate será acompanhada da não-linearidade da curva padrão, e a reprodutibilidade não é ideal; , continue consequentemente ao passo seguinte imediatamente depois da lavagem.

3) Misture bem, se não a reprodutibilidade será pobre.

4) A solução da parada é solução ácida sulfúrica de 2 M, evita o contato de pele.

5) Não use o jogo além da vida útil. O uso de reagentes diluídos ou adulterados do jogo pode conduzir às mudanças em valores do OD da sensibilidade e da detecção. Não substitua reagentes em grupos diferentes de jogos.

6) Reseal microplates não utilizados em sacos ziplock. As soluções padrão e os acopladores incolores são sensíveis à luz e não podem diretamente ser expostos para iluminar-se.

7) Rejeite toda a solução colorindo cuja a cor indicar que a solução degradou. Um valor da detecção de menos de 0,5 para a solução padrão 1 (0 ppb) indica a degradação.

8) A temperatura ótima da reação é 25℃, e a sensibilidade da detecção e o valor do OD mudarão se a temperatura é demasiado alta ou demasiado baixa.

 

9. Data do armazenamento e de expiração

 

Armazenamento: A loja em 2-8°C, não se congela.
Data de expiração: 12 meses; a data de produção está na caixa.
Nota: Se os escapes do empacotamento de vácuo do microplate, ele podem ainda ser usados sem afetar os resultados da análise, assim que você pode usá-la com confiança.

 

Q1: Quando será enviado?
A1: Nós enviaremos os bens para você o mais cedo possível dentro de 7 dias de trabalho após ter recebido o pagamento. (Em caso dos fatores externos tais como a epidemia, a entrega pode ser atrasada)

 

Q2: Apoia OEM/ODM?
A2: Pode ser apoiado, mas a quantidade específica precisa de ser mais de 100.000 partes, que é conveniente para produtos personalizados.

 

Q3: Como sua fábrica está fazendo em termos do controle da qualidade?
A3: Nós certificamos nacionalmente ISO9001 e ISO13485. Nosso processo de produção conforma-se aos procedimentos padrão para assegurar a qualidade de produto a melhor.

 

Q4: Como proporcionar o serviço pós-venda?
A4: Nós proporcionamos o serviço pós-venda técnico em linha profissional. Nós podemos fornecê-lo a orientação cara-a-cara através do vídeo, do telefone, etc.

 

Q5: Que é o método do pagamento?
A5: Nós recebemos o pagamento por T/T.

 

Q6: Como enviar?
A6: Escolha o melhor método de envio para você obtendo citações de nossos muitos portadores cooperativos, e igualmente de navio de acordo com suas exigências.