Anticorpo do Nitrofuran AHD ELISA Food Rapid Test Kit para a sensibilidade 0.04ppb 96Wells/Kit do leite

Nitrofuran AHD ELISA Food Safety Test Kit para a sensibilidade 0.04ppb 96Wells/Kit do leite

 

1. Princípio do Nitrofuran AHD ELISA Food Safety Test Kit

 

Este jogo do teste é baseado no immunoassay competitivo da enzima para a detecção de Aminohydantion (AHD) na amostra. Os antígenos de acoplamento são pré-revestidos nas micro-bem listras. O Aminohydantion (AHD) na amostra e os antígenos de acoplamento pré-revestidos nas micro-bem listras competem para os anti-AHD anticorpos. Depois que a adição do conjugado da enzima, a carcaça de TMB é adicionada para a coloração. O valor da densidade ótica (OD) da amostra tem uma correlação negativa com o AHD nele. Este valor é comparado à curva padrão e a concentração de AHD é obtida subseqüentemente.

 

2. Especificações técnicas do Nitrofuran AHD ELISA Food Safety Test Kit

 

Sensibilidade: 0.04ppb

Temperatura da incubação: 25℃

Tempo da incubação: 30min~15min

Tecido do limite de detecção, ovo, mel: 0.1ppb

Taxa da reação cruzada

AHD 100%

AMOZ < 0="">

AOZ < 0="">

SEM < 0="">

Taxa de recuperação

Tecido, ovo 95±25%

Mel 75±25%

 

3. Componentes

 

1	Micro-bem tiras	12 tiras com os 8 removíveis poços cada
2	solução 6× padrão (1 mL cada um)	0ppb	0.04ppb
		0.12ppb	0.36ppb
		1.08ppb	3.24ppb
3	Conjugado da enzima	7ml	tampão vermelho
4	Solução de funcionamento do anticorpo	7ml	tampão azul
5	Carcaça A	7ml	tampão branco
6	SubstrateB	7ml	tampão preto
7	Pare a solução	7ml	tampão amarelo
8	20× concentrou o amortecedor de lavagem	40ml	tampão branco
9	2× concentrou redissolving a solução	50ml	tampão transparente
10	2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3)	10ml	tampão preto

 

4. Materiais exigidos mas não fornecidos

 

1) Equipamentos: o leitor do microplate, impressora, homogenizador, dispositivo da nitrogênio-secagem, redemoinho, centrifugador, medindo introduz com pipeta, o equilíbrio (uma sensibilidade recíproca de 0,01 g), incubadora, banho maria;

2) Micropipettors: monocanal 20-200µL, 100-1000µL, e multi-canal 30~300µl;

3) Reagentes: NaOH, acetato de etilo, n-hexano, HCI (36,5% aproximados), K2HPO4·3H2O

 

5. Pré-tratamento da amostra

 

Instruções

Os seguintes pontos devem ser tratados antes do pré-tratamento do tipo da amostra:

1) Somente as pontas descartáveis podem ser usadas para as experiências e as pontas devem ser mudadas quando usadas para absorver reagentes diferentes;

2) Antes da experiência, cada equipamento experimental deve estar limpo e deve re-ser limpado caso necessário, a fim evitar a contaminação que interfere com os resultados experimentais.

Preparação da solução antes do pré-tratamento da amostra:

) uns 0,1 M K2HPO4: dissolva 11.4g K2HPO4·3H2O na água deionized a 500mL.

b) 1 M HCl: dissolva 8.6mL HCI (36,5% aproximados) na água deionized a 100mL.

c) NaOH de 1 M: dissolva NaOH 4g na água deionized a 100mL.

d) o 2×concentrated que redissolving a solução é diluído com água deionized no 1:1 (1mL concentrou redissolving a solução + 1 mL de água deionized), usado para redissolving da amostra.

 

5,1 preparação das amostras

a) Tecido, ovo

1) Pese 1± 0.05g da amostra homogeneizada, adicione 4mL da água destilada, 0.5mL 1 M HCI e 100µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) a cada tubo, agitam corretamente para 2min;.

2) Incube o ℃ at37 sobre a noite (horas approx16) ou incube at56℃ pelo banho maria (2 horas).

3) Adicione o acetato de etilo 5mL 0.1M K2HPO4, NaOH de 0.4mL 1M e 6mL a cada tubo, agitação para 30s.

4) Centrifugador em 4000r/min acima na temperatura ambiente (℃ 20-25) para 10min (se há uma emulsificação ou camada do acetato de etilo não é bastante para 3ml, não incubam a amostra no banho maria 80℃ para 10min e centrifugador repetidamente; ou aumente a velocidade e estenda a época do centrifugador).

5) Transferência 3mL da camada do acetato de etilo em um tubo centrífugo novo e para evaporar a seco pelo nitrogênio ou pelo ar em 50℃.

6) Dissolva os resíduos secos no N-hexano 2mL, adicione 1mL da solução redissolving diluída, mistura corretamente por 30 segundos, centrifugador acima de 4000 r/min na temperatura ambiente (℃ 20-25) para o minuto 10; Remova a fase do N-hexano da acima-camada (se há uma emulsificação, após ter removido a fase do N-hexano da acima-camada, incubam a amostra no banho maria 70℃ para 10-20min, centrifugam-na repetidamente).

7) Tome a 50 o µL do mais baixo para a análise.

Dobra da diluição da amostra: 2

b) Mel

1) Pese 2± 0.05g da amostra homogeneizada (mel), adicione 4mL da água destilada, 0.5mL 1 M HCI e 100 o µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) a cada tubo, agita corretamente para 2min;.

2) Incube o ℃ at37 sobre a noite (horas approx16) ou incube at56℃ pelo banho maria (2 horas).

3) Adicione o acetato de etilo 5mL 0.1M K2HPO4, NaOH de 0.4mL 1M e 6mL a cada tubo, agitação para 30s.

4) Centrifugador em 4000r/min acima na temperatura ambiente (20-25℃) para 10min (se há uma emulsificação ou camada do acetato de etilo não é bastante para 3ml, não incubam a amostra no banho maria 80℃ para 10min e centrifugador repetidamente; ou aumente a velocidade e estenda a época do centrifugador).

5) Transferência 3mL da camada do acetato de etilo em um tubo centrífugo novo e para evaporar a seco pelo nitrogênio ou pelo ar no ℃ 50.

6) Dissolva os resíduos secos no N-hexano 2mL, adicione 1mL da solução redissolving diluída, mistura corretamente por 30 segundos, centrifugador acima de 4000r/min na temperatura ambiente (℃ 20-25) para o minuto 10; Remova a fase do N-hexano da acima-camada (se há uma emulsificação, após ter removido a fase do N-hexano da acima-camada, incubam a amostra no banho maria 70℃ para 10-20min, centrifugam-na repetidamente).

7) Tome a 50 o µL do mais baixo para a análise.

Dobra da diluição da amostra: 1

 

6. Procedimentos de ELISA

 

6,1 instruções

1) Traga todos os reagentes e micro-bem tiras à temperatura ambiente (℃ 20-25) antes de usar;

2) Retorne todos os reagentes ao ℃ 2-8 imediatamente depois do uso;

3) A reprodutibilidade da análise de ELISA, em grande parte, depende da consistência da lavagem da placa. A operação correta do lavagem da placa é o ponto-chave em ELISA os procedimentos;

4) Para a incubação em temperaturas constantes, todas as amostras e reagentes devem evitar a exposição à luz, e cada microplate deve ser selado pela membrana da tampa.

 

6,2 procedimentos da operação

1) Traga o jogo do teste à temperatura ambiente (20-25 ℃) no mínimo 30min, note que cada reagente deve ser agitado para misturar uniformemente antes de usar, põe as micro-bem tiras exigidas em quadros da placa. Re-selou o microplate não utilizado, loja no ℃ 2-8, não congelado.

2) Preparação da solução: 40mL diluído do amortecedor de lavagem concentrado 20 × com água deionized no 1:19 (amortecedor de lavagem concentrado 20 × de 1 partes + 19 porções da água deionized). Ou prepare como necessário.

3) Numeração: número os micro-poços de acordo com amostras e a solução padrão; cada amostra e solução padrão devem ser executadas em duplicado, gravam suas posições.

4) Adicione 50µL da amostra ou da solução padrão em poços duplicados separados; adicione o conjugado então 50µL da solução de funcionamento do anticorpo em cada poço, mistura da enzima 50ul delicadamente agitando a placa manualmente. Sele o microplate com a membrana da tampa, andincubate no ℃ 25 para 30min.

5) Derrame o líquido fora do microwell, aleta para secar no papel absorvente, adicione 250µL/well do amortecedor de lavagem para lavar o microplate por 15-30s, remova-o então e bata-o para secar com papel absorvente, repita-o 4-5 vezes. (Se há as bolhas após bater, os cortou com as pontas limpas).

6) Coloração: adicione 50µL da carcaça A e então 50µL da carcaça B em cada poço. Misture delicadamente agitando a placa manualmente, a seguir incube no ℃ 25 para o minuto 15 na obscuridade para a coloração.

7) Determinação: adicione 50µL do param a solução em cada poço. Misture delicadamente agitando a placa manualmente. Ajuste o comprimento de onda do leitor do microplate em 450nm para determinar o valor do OD de cada poço. (Recomende ler o valor do OD no duplo-comprimento de onda 450/630nm dentro de 5 minutos).

 

7. Julgamento do resultado

 

Há dois métodos para julgar os resultados: primeiro é o julgamento áspero, quando o segundo for a determinação quantitativa. Nota que o valor do OD da amostra tem uma correlação negativa com o índice de AHD.

7,1 determinação qualitativa

A escala de concentração (ng/mL) pode ser obtida de comparar o valor médio do OD da amostra com o aquele da solução padrão. Supor que o valor do OD da amostraⅠ é 0,3, e aquele do Ⅱ da amostra é 1.0ppb, o valor do OD de soluções padrão é: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 0.04ppb, 1,415 para 0.12ppb, 0,74 para 0.36ppb, 0,313 para 1.08ppb, 0,155 para 3.24ppb, em conformidade a escala de concentração do Ⅰ da amostra são 1,08 a 3.24ppb, e aquele do Ⅱ da amostra é 0,12 a 0.36ppb.

7,2 determinação quantitativa

Os valores médios dos valores da absorvência são obtidos para o valor médio do OD (b) da amostra e da solução padrão divididas pelo valor do OD (B0) da primeira solução padrão (0 padrões) e multiplicadas subseqüentemente em 100%, isto é,

Porcentagem do valor da absorvência =	B	×100%
	B0

Valor do OD da média de B-the (poços dobro) da amostra ou da solução padrão

Valor do OD da média de B0-the da solução 0ng/mL padrão

Tire a curva padrão com as porcentagens da absorção da solução padrão e os valores do semilogarithm da solução padrão de AHD (ng/mL) como o y e a X-linha central, respectivamente. Leia a concentração correspondente da amostra da curva padrão incorporando sua porcentagem da absorção na curva padrão. O valor resultante é multiplicado subseqüentemente pela dobra correspondente da diluição, obtendo finalmente a concentração de AHD na amostra.

 

8. Precauções

 

1) A temperatura ambiente é mais baixa do que 25℃ ou a temperatura e a amostra do reagente não são retornados à temperatura ambiente (20-25℃), que fará com que o valor padrão do OD diminua.

2) Durante o processo de lavagem, a secagem do microplate será acompanhada das não-linearidades da curva padrão e da reprodutibilidade insatisfatória; , continue consequentemente ao passo seguinte imediatamente depois da lavagem.

3) Misture bem, se não haverá uma reprodutibilidade pobre.

4) Pare a solução é solução ácida sulfúrica de 2 M, evitam o contato com pele.

5) Não use o jogo além da data de validade. O uso de reagentes diluídos ou adulterados do jogo pode conduzir às mudanças em valores do OD da sensibilidade e da detecção. Não substitua reagentes em grupos diferentes de jogos.

6) Reseal microplates não utilizados em sacos autoadesivos. As soluções padrão e os acopladores incolores são sensíveis à luz e não podem diretamente ser expostos para iluminar-se.

7) Rejeite toda a solução de matização cuja a cor indicar que a solução degradou. Um valor da detecção de menos de 0,5 para a solução padrão 1 (0 ppb) indica a degradação.

8) A temperatura ótima da reação é 25℃, e a sensibilidade da detecção e o valor do OD mudarão se a temperatura é demasiado alta ou demasiado baixa.

 

9. Data do armazenamento e de expiração

 

Armazenamento: loja no ℃ 2 a 8, não congelado.

Data de expiração: 12 meses; a data da produção está na caixa.

Nota: Se o pacote do vácuo do microplate tem o escapamento, é ainda válido usar-se, não afeta o resultado da análise, seja relaxar para usar-se.

 

 

Q1: Quando será enviado?
A1: Nós enviaremos os bens para você o mais cedo possível dentro de 7 dias de trabalho após ter recebido o pagamento. (No caso da epidemia e de outros fatores externos, pode haver uns atrasos no transporte)

 

Q2: Apoia OEM/ODM?
A2: Pode ser apoiado, mas a quantidade específica precisa de ser mais de 100.000 partes para facilitar produtos personalizados.

 

Q3: Como sua fábrica está fazendo em termos do controle da qualidade?
A3: Nós temos ISO9001 e ISO13485 certificados pelo estado. Nosso processo de produção é de acordo com o processo padrão, que pode se assegurar de que a qualidade dos produtos seja ótima.

 

Q4: Como é pós-venda serviço forneceu?
A4: Nós proporcionamos o serviço pós-venda técnico em linha profissional. Nós podemos fornecê-lo a orientação cara-a-cara sob a forma do vídeo, dos telefonemas, etc.

 

Q5: Que é o método do pagamento?
A5: Nós recebemos o pagamento por T/T.

 

Q6: Como enviar?
A6: Obtendo cotações de nossos muitos portadores cooperativos, escolha a melhor maneira de enviar para você, ou você pode enviar de acordo com suas exigências.