Sensibilidade 0.01ppb 96Wells/Kit do Nitrofuran AOZ Kit Test ELISA For Fish Shrimp Honey

Nitrofuran AOZ ELISA Test Kit para o camarão Honey Sensitivity 0.01ppb 96Wells/Kit dos peixes

 

1. Princípio

Este fjogo rápido do teste da segurança do oodé baseado no immunoassay competitivo da enzima para a detecção de AOZ na amostra. Os antígenos de acoplamento são pré-revestidos nas micro-bem listras. Os AOZ na amostra e nos antígenos de acoplamento pré-revestidos nas micro-bem listras competem para os anti-AOZ anticorpos. Depois que a adição do conjugado da enzima, a carcaça de TMB é adicionada para a coloração. O valor da densidade ótica (OD) da amostra tem uma correlação negativa com o AOZ nele. Este valor é comparado à curva padrão e a concentração de AOZ é obtida subseqüentemente.

2. Componentes

1	Micro-bem tiras	12 tiras com os 8 removíveis poços cada
2	solução 6× padrão (1mL cada um)	0ppb	0.01ppb
		0.03ppb	0.09ppb
		0.27ppb	0.81ppb
3	Conjugado da enzima	7ml	tampão vermelho
4	Solução de funcionamento do anticorpo	7ml	tampão azul
5	Carcaça A	7ml	tampão branco
6	SubstrateB	7ml	tampão preto
7	Pare a solução	7ml	tampão amarelo
8	20× concentrou o amortecedor de lavagem	40ml	tampão branco
9	2× concentrou redissolving a solução	50ml	tampão transparente
10	2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3)	10ml	tampão preto

 

3. Especificações técnicas

Sensibilidade: 0.01ppb

Temperatura da incubação: 25℃

Tempo da incubação: 30min~15min

Limite de detecção

Tecido, ovo, mel: 0.05ppb

Taxa da reação cruzada

AOZ 100%

AMOZ <0>

AHD <0>

SEM <0>

Taxa de recuperação

Tecido, ovo 95±25%

Mel 85±23%

 

4. Materiais exigidos mas não fornecidos

1) Equipamentos: o leitor do microplate, impressora, homogenizador, dispositivo da nitrogênio-secagem, redemoinho, centrifugador, medindo introduz com pipeta, o equilíbrio (uma sensibilidade recíproca de 0,01 g), incubadora, banho maria;

2) Micropipettors: µL 20-200, 100-1000 µL do monocanal, e µl do multi-canal 30~300;

3) Reagentes: NaOH, acetato de etilo, n-hexano, HCI (36,5% aproximados), K2HPO4·3H2O

 

5. Pré-tratamento da amostra

Instruções

Os seguintes pontos devem ser tratados antes do pré-tratamento do tipo da amostra:

1) Somente as pontas descartáveis podem ser usadas para as experiências e as pontas devem ser mudadas quando usadas para absorver reagentes diferentes;

2) Antes da experiência, cada equipamento experimental deve estar limpo e deve re-ser limpado caso necessário, a fim evitar a contaminação que interfere com os resultados experimentais.

Preparação da solução antes do pré-tratamento da amostra:

1) 0,1 M K2HPO4: dissolva g 11,4 K2HPO4·3H2O na água deionized a 500mL.

2) 1 M HCl: dissolva 8.6mL HCI (36,5% aproximados) na água deionized a 100mL.

3) NaOH de 1 M: dissolva NaOH 4g na água deionized a 100mL.

4) o 2×concentrated que redissolving a solução é diluído com água deionized no 1:1 (1mL concentrou redissolving a solução + a água deionized 1mL), usado para redissolving da amostra.

 

5,1 preparação das amostras

a)Tecido, ovo

1) Pese 1± 0.05g da amostra homogeneizada, adicione 4mL da água destilada, 0.5mL 1 M HCI e 100µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) a cada tubo, agitam corretamente para 2min;.

2) Incube at37℃ sobre a noite (horas approx16) ou incube at56℃ pelo banho maria (2 horas).

3) Adicione o acetato de etilo 5mL 0.1M K2HPO4, NaOH de 0.4mL 1M e 6mL a cada tubo, agitação para 30s.

4) Centrifugador em 4000r/min acima na temperatura ambiente (℃ 20-25) para 10min (se há uma emulsificação ou camada do acetato de etilo não é bastante para 3ml, não incubam a amostra no banho maria de 80 ℃ para 10min e centrifugador repetidamente; ou aumente a velocidade e estenda a época do centrifugador).

5) Transferência 3mL da camada do acetato de etilo em um tubo centrífugo novo e para evaporar a seco pelo nitrogênio ou pelo ar em 50℃.

6) Dissolva os resíduos secos no N-hexano 2mL, adicione 1mL da solução redissolving diluída, mistura corretamente por 30 segundos, centrifugador acima de 4000 r/min na temperatura ambiente (℃ 20-25) para o minuto 10; Remova a fase do N-hexano da acima-camada (se há uma emulsificação, após ter removido a fase do N-hexano da acima-camada, incubam a amostra no banho maria de 70 ℃ para 10-20min, centrifugam-na repetidamente).

7) Tome a 50 o µL do mais baixo para a análise.

Dobra da diluição da amostra: 2

 

b) Mel

1) Pese 2± 0.05g da amostra homogeneizada (mel), adicione 4mL da água destilada, 0.5mL 1 M HCI e 100 o µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) a cada tubo, agita corretamente para 2min;.

2) Incube at37℃ sobre a noite (horas approx16) ou incube at56℃ pelo banho maria (2 horas).

3) Adicione o acetato de etilo 5mL 0.1M K2HPO4, NaOH de 0.4mL 1M e 6mL a cada tubo, agitação para 30s.

4) Centrifugador em 4000r/min acima na temperatura ambiente (20-25℃) para 10min (se há uma emulsificação ou camada do acetato de etilo não é bastante para 3ml, não incubam a amostra no banho maria de 80 ℃ para 10min e centrifugador repetidamente; ou aumente a velocidade e estenda a época do centrifugador).

5) Transferência 3mL da camada do acetato de etilo em um tubo centrífugo novo e para evaporar a seco pelo nitrogênio ou pelo ar no ℃ 50.

6) Dissolva os resíduos secos no N-hexano 2mL, adicione 1mL da solução redissolving diluída, mistura corretamente por 30 segundos, centrifugador acima de 4000r/min na temperatura ambiente (℃ 20-25) para o minuto 10; Remova a fase do N-hexano da acima-camada (se há uma emulsificação, após ter removido a fase do N-hexano da acima-camada, incubam a amostra no banho maria de 70 ℃ para 10-20min, centrifugam-na repetidamente).

7) Tome a 50 o µL do mais baixo para a análise.

Dobra da diluição da amostra: 1

 

6. Procedimentos de ELISA

6,1 Instruções

1) Traga todos os reagentes e micro-bem tiras à temperatura ambiente (℃ 20-25) antes de usar;

2) Retorne todos os reagentes ao ℃ 2-8 imediatamente depois do uso;

3) A reprodutibilidade da análise de ELISA, em grande parte, depende da consistência da lavagem da placa. A operação correta do lavagem da placa é o ponto-chave em ELISA os procedimentos;

4) Para a incubação em temperaturas constantes, todas as amostras e reagentes devem evitar a exposição à luz, e cada microplate deve ser selado pela membrana da tampa.

 

6,2 Procedimentos da operação

1) Traga o jogo do teste ao minuto 30 da temperatura ambiente (℃ 20-25) no mínimo, note que cada reagente deve ser agitado para misturar uniformemente antes de usar, põe as micro-bem tiras exigidas em quadros da placa. Re-selou o microplate não utilizado, loja no ℃ 2-8, não congelado.

2) Preparação da solução: 40mL diluído do amortecedor de lavagem concentrado 20 × com água deionized no 1:19 (amortecedor de lavagem concentrado 20 × de 1 partes + 19 porções da água deionized). Ou prepare como necessário.

3) Numeração: número os micro-poços de acordo com amostras e a solução padrão; cada amostra e solução padrão devem ser executadas em duplicado, gravam suas posições.

4) Adicione o µL 50 da amostra ou da solução padrão em poços duplicados separados; adicione 50 a enzima do ul que conjuga então o µL 50 da solução de funcionamento do anticorpo em cada poço, mistura delicadamente agitando a placa manualmente. Sele o microplate com a membrana da tampa, andincubate 25 no ℃ for30min.

5) Derrame o líquido fora do microwell, aleta para secar no papel absorvente, adicione 250 µL/well do amortecedor de lavagem para lavar o microplate para 15-30 s, remova-os então e bata-os para secar com papel absorvente, repita-os 4-5 vezes. (Se há as bolhas após bater, os cortou com as pontas limpas).

6) Coloração: adicione o µL 50 o µL da carcaça A e então 50 da carcaça B em cada poço. Misture delicadamente agitando a placa manualmente, a seguir incube 25 no ℃ for15min na obscuridade para a coloração.

7) Determinação: adicione 50 que o µL do para a solução em cada poço. Misture delicadamente agitando a placa manualmente. Ajuste o comprimento de onda do leitor do microplate em 450nm para determinar o valor do OD de cada poço. (Recomende ler o valor do OD no duplo-comprimento de onda 450/630nm dentro de 5 minutos).

 

7. Julgamento do resultado

Há dois métodos para julgar os resultados: primeiro é o julgamento áspero, quando o segundo for a determinação quantitativa. Nota que o valor do OD da amostra tem uma correlação negativa com a concentração de AOZ.

7,1 determinação qualitativa

A escala de concentração (ng/mL) de AOZ pode ser obtida de comparar o valor médio do OD da amostra com o aquele da solução padrão. Supor que o valor do OD da amostraⅠ é 0,3, e aquele do Ⅱ da amostra é 1,0, o valor do OD de soluções padrão é: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 0.01ppb, 1,415 para 0.03ppb, 0,74 para 0.09ppb, 0,313 para 0.27ppb, 0,155 para 0.81ppb, em conformidade a escala de concentração do Ⅰ da amostra são 0.27ppb a 0.81ppb, e aquele do Ⅱ da amostra é 0.03ppb a 0.09ppb.

7,2 determinação quantitativa

Os valores médios dos valores da absorvência são obtidos para o valor médio do OD (b) da amostra e da solução padrão divididas pelo valor do OD (B0) da primeira solução padrão (0 padrões) e multiplicadas subseqüentemente em 100%, isto é,

 

Porcentagem do valor da absorvência =	B	×100%
	B0

 

Valor do OD da média de B-the da amostra ou da solução padrão

Valor do OD da média de B0-the das 0 soluções padrão de ng/mL

Tire a curva padrão com as porcentagens da absorção da solução padrão e os valores do semilogarithm da solução padrão de AOZ (ng/mL) como o y e a X-linha central, respectivamente. Leia a concentração correspondente da amostra da curva padrão incorporando sua porcentagem da absorção na curva padrão. O valor resultante é multiplicado subseqüentemente pela dobra correspondente da diluição, obtendo finalmente a concentração de AOZ na amostra.

 

8. Precauções

1) A temperatura ambiente abaixo do ℃ 25 ou a temperatura dos reagentes e das amostras que não estão sendo retornados à temperatura ambiente (℃ 20-25) conduzirão a um valor padrão mais baixo do OD.

2) A seca do microplate no processo de lavagem será acompanhada das situações que incluem as curvas padrão não-lineares e a reprodutibilidade indesejável; Continue assim ao passo seguinte imediatamente depois da lavagem.

3) Misture uniformemente, se não haverá a reprodutibilidade indesejável.

4) A solução da parada é a solução ácida sulfúrica de 2 M, evita contactar com a pele.

5) Não use o jogo que excede sua data de expiração. O uso de reagentes diluídos ou adulterados dos jogos conduzirá às mudanças na sensibilidade e nos valores de detecção do OD. Não troque os reagentes dos jogos de lotes diferentes para usar-se.

6) Põe o microplate não utilizado em um saco da auto-selagem ao re-selo ele. A solução padrão e a cor incolor anteriores são sensíveis à luz, e assim não pode diretamente ser exposta à luz.

7) Rejeite a solução da coloração com toda a cor que indicar a degeneração desta solução. O valor de detecção da solução padrão 1 (0 ppb) de menos de 0,5 indica sua degeneração.

8) A temperatura a melhor da reação é o ℃ 25, e as temperaturas demasiado altas ou demasiado baixas conduzirão às mudanças na sensibilidade de detecção e em valores do OD.

 

9. Data do armazenamento e de expiração

Armazenamento: loja no ℃ 2-8, não congelado.

Data de expiração: 12 meses; a data da produção está na caixa.

Nota: Se o pacote do vácuo do microplate tem o escapamento, é ainda válido usar-se, não afeta o resultado da análise, seja relaxar para usar-se.

 

 

Q1: Quanto tempo tomará para que você envie?
A1: Geralmente navios dentro de 7 dias de trabalho.

 

Q2: Você apoia OEM/ODM?
A2: pode ser apoiado. Nós podemos personalizar de acordo com suas necessidades específicas e quantidades específicas.

 

Q3: Como sua fábrica está fazendo em termos do controle da qualidade?
A3: Nós temos a certificação ISO9001 e ISO13485 a certificação, até agora todo o processo de produção, nós temos regras padrão, nós cumprimos com o comportamento e as leis relevantes do governo.

 

Q4: O serviço pós-venda é garantido?
A4: Nós proporcionamos o serviço pós-venda técnico em linha profissional. Se o produto falha durante a experiência, nós podemos fornecer
orientação linear através do telefone, do vídeo e dos outros formulários.

 

Q5: Que é sua quantidade de ordem mínima?
A5: 1Kit.

 

Q6: Que é o método de envio?
A6: Pode ser enviado por expresso (FEDEX, UPS, DHL, EMS, etc.) ou pelo ar e pela terra. Confirme por favor connosco antes de colocar uma ordem.