Leite rápido 96Wells/Kit ISO9001 da detecção de ELISA Milk Test Kit For da melamina

Kit de teste ELISA de melamina para detecção de leite 96 Wells/Kit ISO9001

 

1. Princípio

Este kit de teste é baseado no imunoensaio enzimático competitivo indireto para a detecção de melamina na amostra.O antígeno de acoplamento é pré-revestido nas tiras do micropoço.A melamina na amostra e os antígenos de acoplamento pré-revestidos nas tiras dos micropoços competem pelos anticorpos anti-melamina.Após a adição do conjugado enzimático, o substrato TMB é adicionado para coloração.O valor da densidade óptica (OD) da amostra de teste tem uma correlação negativa com a concentração de melamina na amostra.Este valor é comparado com a curva padrão e posteriormente é obtida a concentração de Melamina.

 

 

2.Kit de teste de leiteComponentes

1	Tiras de micropoços	12 tiras com 8 removíveis poços cada
2	6 × solução padrão (1 mL cada)	0ppb	0,5 ppb
		1,5ppb	4,5ppb
		13,5ppb	40,5ppb
3	Spiking solução padrão	1 ppm	1 ml
4	conjugado enzimático	7ml	boné vermelho
5	Solução de trabalho de anticorpo	7ml	boné azul
6	Substrato A	7ml	boné branco
7	Substrato B	7ml	boné preto
8	Solução de parada	7ml	boné amarelo
9	10x amostra extraindo uma solução	50ml	tampa transparente
10	Solução B de extração de amostra 20x	50ml	boné azul
11	20× tampão de lavagem concentrado	15ml	boné branco

 

3. Especificações técnicas

Sensibilidade: 0,5ppb

Temperatura da incubadora: 25 ℃

Tempo de incubação: 30min～15min

Limite de detecção:

Manteiga, doces, queijo 10ppb

Taxa de reação cruzada:

Melamina 100%

Taxa de recuperação:

Manteiga 90±25%

Doces, queijo 95±25%

 

4. Materiais necessários, mas não fornecidos

1) Equipamentos: leitor de microplacas, impressora, vortex, centrífuga, pipetas de medição, balança (sensibilidade recíproca de 0,01 g), banho-maria de 70 ℃;

2) Micropipetadores: canal único 20~200 µL, 100~1000 µL;e multicanal 30～300 μl;

 

5. Pré-tratamento da amostra

Instruções (Os seguintes pontos devem ser tratados antes do pré-tratamento)

1) Somente as ponteiras descartáveis ​​podem ser utilizadas para os experimentos e as ponteiras devem ser trocadas quando utilizadas para reagentes diferentes;

2) Antes do experimento, cada equipamento experimental deve ser limpo e deve ser re-limpado se necessário, a fim de evitar contaminação que interfira nos resultados experimentais.

Preparação da solução

1) Amostra extraindo uma solução

Dilua 10x a amostra extraindo uma solução com água deionizada a 1:9;

2) Solução B de extração de amostras

Dilua 20x a solução B de extração de amostra com água deionizada a 1:19.

 

5.1 Manteiga

1) Coloque 1 g de manteiga fresca em um tubo de centrífuga de 50 ml, adicione 5 ml de solução de extração de amostras A, incube em banho-maria a 70 ℃ por 5 minutos, vórtex e agite por 5 minutos, centrifugue acima de 4000 r/min em temperatura ambiente por 5 minutos;

2) Pegue 50ul de líquido da camada inferior para análise

Dobra de diluição da amostra: 5

5.2 doces, queijo

1) Pegue 1 g de amostra fresca em tubo de centrífuga de 50 ml, adicione 5 ml de solução de extração de amostra B, incube em banho-maria de 70 ℃ por 5 minutos, vórtice e agite por 5 minutos, centrifugue acima de 4000 r/min em temperatura ambiente por 5 minutos;

2) Pegue 50ul de líquido da camada inferior para análise

Dobra de diluição da amostra: 5

 

6. Procedimentos ELISA

6.1 Instruções

1 Leve todos os reagentes e tiras de micropoços à temperatura ambiente (20-25 ℃).

2 Devolva todos os reagentes a 2-8 ℃ imediatamente após o uso.

3 A reprodutibilidade da análise ELISA, em grande parte, depende da consistência da lavagem da placa.A correta operação de lavagem da placa é o ponto chave nos procedimentos de ELISA.

4 Para a incubação a temperaturas constantes, todas as amostras e reagentes devem evitar a exposição à luz, e cada microplaca deve ser selada pela membrana de cobertura.

6.2 Procedimentos de operação

1)Traga o kit de teste à temperatura ambiente (20-25 ℃) por pelo menos 30 min, observe que cada reagente deve ser agitado uniformemente antes do uso;coloque as tiras de micropoços necessárias em quadros de placas.Selou novamente a microplaca não utilizada, armazenada a 2-8 ℃, não congelada.

2)Preparo da solução: diluir 15mL do tampão de lavagem concentrado 20X com a água deionizada para 300mL para uso;

3)Numeração: numerar os micropoços de acordo com as amostras e solução padrão;cada amostra e solução padrão deve ser realizada em duplicata;registrar suas posições.

4)Adicione 50µL da amostra/solução padrão para separar poços duplicados, depois adicione 50µL de conjugado enzimático, depois adicione 50µL de solução de trabalho de anticorpo a cada poço, agite adequadamente, sele a microplaca com a membrana de cobertura e incube a 25℃ por 30 min;

5)Despeje o líquido dos poços, lave a microplaca com o tampão de lavagem diluído a 250 µL/poço por 5-6 vezes.Cada vez mergulhe o poço com o tampão de lavagem diluído por 15-30 segundos e, em seguida, aba para secar em papel absorvente (se houver bolhas após bater, corte-as com as pontas limpas).

6)Coloração: adicionar 50µL do substrato A, depois 50µL do substrato B em cada poço.Misture suavemente agitando a placa manualmente e incube a 25 ℃ por 15 minutos no escuro para coloração;

7)Determinação: adicione 50µL da solução de parada em cada poço.Misture suavemente agitando a placa manualmente.Defina o comprimento de onda do leitor de microplacas em 450 nm para determinar o valor OD de cada poço.(Recomende ler o valor OD no comprimento de onda duplo 450/630 nm em 5 min).

 

7. Julgamento do resultado

Existem dois métodos para julgar os resultados;o primeiro é o julgamento aproximado, enquanto o segundo é a determinação quantitativa.Observe que o valor de DO da amostra tem uma correlação negativa com o conteúdo de melamina.

7.1 Determinação qualitativa

A faixa de concentração (ng/mL) pode ser obtida comparando o valor médio de DO da amostra de teste com o da solução padrão.Supondo que o valor de DO da amostraⅠ seja 0,3 e o da amostraⅡ seja 1,0, o valor de DO das soluções padrão é: 2,043 para 0ppb, 1,604 para 0,5ppb, 1,101 para 1,5ppb, 0,512 para 4,5ppb, 0,161 para 13,5ppb , 0,055 para 40,5ppb, portanto, a faixa de concentração da amostraⅠ é de 4,5 a 13,5ppb, e a da amostra Ⅱ é de 1,5 a 4,5ppb.

7.2 Determinação quantitativa

Os valores médios dos valores de absorbância são equivalentes à porcentagem do valor médio de DO (B) da amostra de teste e da solução padrão dividido pelo valor de DO (B0) da primeira solução padrão (0 padrão) e subsequentemente multiplicado por 100 %, isso é

 

Porcentagem do valor de absorbância =	B	×100%
	B0

 

B—o valor de OD médio (poços duplos) da amostra de teste ou da solução padrão

B0 - o valor médio de OD da solução padrão de 0ng/mL

Desenhe a curva padrão com as porcentagens de absorção das soluções padrão e os valores semilogarítmicos das soluções padrão de melamina (ng/mL) como eixo Y e X, respectivamente.Leia a concentração correspondente da amostra de teste da curva padrão incorporando sua porcentagem de absorção na curva padrão.O valor resultante é posteriormente multiplicado pela dobra de diluição correspondente, obtendo-se finalmente a concentração de Melamina na amostra.

 

8. Precauções

1)A temperatura ambiente abaixo de 25 ℃ ou a temperatura dos reagentes e das amostras de teste não retornando à temperatura ambiente (20-25 ℃) levará a um valor de OD padrão mais baixo.

2)O ressecamento da microplaca no processo de lavagem será acompanhado pelas situações que incluem as curvas padrão não lineares e a reprodutibilidade indesejável;Portanto, continue na próxima etapa imediatamente após a lavagem.

3)Misture uniformemente, caso contrário haverá reprodutibilidade indesejável.

4)A solução de parada é a solução de ácido sulfúrico 2 M, evite o contato com a pele.

5)Não use o kit após o prazo de validade.O uso de reagentes diluídos ou adulterados dos kits levará a alterações na sensibilidade e nos valores de DO de detecção.Não troque os reagentes dos kits de lotes diferentes para uso.

6)Coloque a microplaca não utilizada em um saco autovedante para fechá-la novamente.A substância padrão e o formador de cor incolor são sensíveis à luz e, portanto, não podem ser expostos diretamente à luz.

7)Descarte a solução de coloração com qualquer cor que indique a degeneração desta solução.O valor de detecção da solução padrão 1(0 ppb) inferior a 0,5 indica sua degeneração.

8)A temperatura de reação ideal é de 25 ℃, e temperaturas muito altas ou baixas resultarão em mudanças na sensibilidade de detecção e nos valores OD.

 

9. Data de armazenamento e validade

Armazenamento: armazenado a 2-8 ℃, não congelado.

Prazo de validade: 12 meses;a data de produção está na caixa

Observação: Se a embalagem a vácuo da microplaca apresentar vazamento, ela ainda é válida para uso, não afeta o resultado do teste, pode ser usada com tranquilidade.

 

 

Q1: Quanto tempo vai demorar para você enviar?
A1: Normalmente enviado dentro de 7 dias úteis.

 

Q2: você suporta OEM/ODM?
A2: pode ser suportado.Podemos personalizar de acordo com suas necessidades específicas e quantidades específicas.

 

P3: como está sua fábrica em termos de controle de qualidade?
A3: Temos certificação ISO9001 e certificação ISO13485, até agora todo o processo de produção, temos regras padrão, cumprimos o comportamento e as leis relevantes do governo.

 

Q4: O serviço pós-venda é garantido?
A4: fornecemos serviço pós-venda técnico online profissional.Se o produto falhar durante o experimento, podemos fornecer
orientação individual por telefone, vídeo e outros formulários.

 

Q5: Qual é a sua quantidade mínima de pedido?
A5: 1Kit.

 

Q6: Qual é o método de envio?
A6: Pode ser enviado por expresso (FEDEX, UPS, DHL, EMS, etc.) ou por via aérea e terrestre. Confirme conosco antes de fazer um pedido.